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    眾所周知細胞培養(yǎng)基的種類繁多,細胞培養(yǎng)方式也較多,如何正確地使用培養(yǎng)基及*大程度地保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)以維持細胞的生長,對每個培養(yǎng)者都很重要。培養(yǎng)基的使用依不同的培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)方式、細胞種類的不同而存在差異。




在進行細胞培養(yǎng)操作之前呢,我們先來了解一些細胞的基本知識吧!


組織培養(yǎng)實際的保存會影響培養(yǎng)物的生長速度!

    動物血清應儲存于–5至–20°C。培養(yǎng)基儲存于2至8°C;請在推薦的保質(zhì)期內(nèi)用完。請將完全培養(yǎng)基(加入添加劑)保存于2 至 8°C,推薦的存放期限為2至4周。此外,盡量減少血清和培養(yǎng)基暴露于光線下的時間。


細胞培養(yǎng)過程*重要的有兩點:一是無菌無污染;二是穩(wěn)態(tài)環(huán)境。

    無菌操作:無菌操作很重要,這對細胞培養(yǎng)影響很大。不要以為加入雙抗或三抗就可以了。雙抗或三抗的添加不僅對細菌或真菌的耐受性增加了,更容易染菌。其次抗生素添加的含量對細胞生命代謝是有一定的毒性作用的,尤其是在做轉(zhuǎn)染的時候。
那么無菌操作該怎么做才能盡可能的防止被污染?
    首先是超凈工作臺的擺放已以及及時滅菌。里面應盡可能少擺放一些沒用的東西,比如槍頭、離心管等。工作臺內(nèi)右邊擺放一瓶75%的酒精,左邊擺放一包無菌擦拭紙,15ml和50ml兩個管架,正前方擺放各量程的移液槍,以及一盞酒精燈。每次使用前后均用75%酒精噴灑,擦手紙擦拭,紫外含臭氧滅菌30min。
    其次是操作過程的細節(jié)注意。將培養(yǎng)基經(jīng)過75%酒精擦拭后放入工作臺的左邊,垃圾桶噴灑75%酒精后放在*右邊,槍頭噴灑75%酒精放于右中間,含有細胞的培養(yǎng)瓶75%酒精擦拭后放置于左中間,將酒精燈放于正中間并點燃,培養(yǎng)瓶打開過火放于酒精燈旁開始傳代或換液等操作。整個過程盡可能靠近火源,以*快的速度操作完。
    *后培養(yǎng)箱每隔一段時間進行清洗消毒滅菌操作,保證培養(yǎng)環(huán)境無菌。

穩(wěn)態(tài)環(huán)境的培養(yǎng):培養(yǎng)基和血清的的選擇很重要,一般能用進口盡量選擇進口的。國內(nèi)很多產(chǎn)品處理的效果不如國外的,對于原代細胞培養(yǎng)尤為重要。買來的培養(yǎng)基和血清應及時分裝以保證無菌。切勿使用37℃水浴加熱,應在4℃冰箱慢慢融化,避免影響血清的質(zhì)量。血清*好使用胎牛血清,添加含量為10%,不宜過高,短時間可以,長時間容易毒害細胞造成細胞分化和衰老。
    細胞培養(yǎng)過程不能過于頻繁換液,應隔3天左右更換或者培養(yǎng)基顏色變黃,所以應每天都去觀察細胞生長的狀態(tài),及時處理。

拿到人胚胎心肌組織來源細胞細胞后,應該注意什么?
    收到人胚胎心肌組織來源細胞細胞后先不要開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察人胚胎心肌組織來源細胞細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議對收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況。
    收到人胚胎心肌組織來源細胞細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度:如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),剩余培養(yǎng)液可與新配制的培養(yǎng)液按一定的比例混合使用,待細胞生長穩(wěn)定后可替換成新配制的培養(yǎng)液;超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

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