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細(xì)胞培養(yǎng)難不難？很負(fù)責(zé)任說，說難也難，說不難也不難，這要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型是什么。

細(xì)胞培養(yǎng)過程*重要的有兩點(diǎn)：一是無菌無污染；二是穩(wěn)態(tài)環(huán)境。
    無菌操作：無菌操作很重要，這對細(xì)胞培養(yǎng)影響很大。不要以為加入雙抗或三抗就可以了。雙抗或三抗的添加不僅對細(xì)菌或真菌的耐受性增加了，更容易染菌。其次抗生素添加的含量對細(xì)胞生命代謝是有一定的毒性作用的，尤其是在做轉(zhuǎn)染的時候。
那么無菌操作該怎么做才能盡可能的防止被污染？
    首先是超凈工作臺的擺放已以及及時滅菌。里面應(yīng)盡可能少擺放一些沒用的東西，比如槍頭、離心管等。工作臺內(nèi)右邊擺放一瓶75%的酒精，左邊擺放一包無菌擦拭紙，15ml和50ml兩個管架，正前方擺放各量程的移液槍，以及一盞酒精燈。每次使用前后均用75%酒精噴灑，擦手紙擦拭，紫外含臭氧滅菌30min。
    其次是操作過程的細(xì)節(jié)注意。將培養(yǎng)基經(jīng)過75%酒精擦拭后放入工作臺的左邊，垃圾桶噴灑75%酒精后放在*右邊，槍頭噴灑75%酒精放于右中間，含有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶75%酒精擦拭后放置于左中間，將酒精燈放于正中間并點(diǎn)燃，培養(yǎng)瓶打開過火放于酒精燈旁開始傳代或換液等操作。整個過程盡可能靠近火源，以*快的速度操作完。
    *后培養(yǎng)箱每隔一段時間進(jìn)行清洗消毒滅菌操作，保證培養(yǎng)環(huán)境無菌。
穩(wěn)態(tài)環(huán)境的培養(yǎng)：培養(yǎng)基和血清的的選擇很重要，一般能用進(jìn)口盡量選擇進(jìn)口的。國內(nèi)很多產(chǎn)品處理的效果不如國外的，對于原代細(xì)胞培養(yǎng)尤為重要。買來的培養(yǎng)基和血清應(yīng)及時分裝以保證無菌。切勿使用37℃水浴加熱，應(yīng)在4℃冰箱慢慢融化，避免影響血清的質(zhì)量。血清*好使用胎牛血清，添加含量為10%，不宜過高，短時間可以，長時間容易毒害細(xì)胞造成細(xì)胞分化和衰老。
    細(xì)胞培養(yǎng)過程不能過于頻繁換液，應(yīng)隔3天左右更換或者培養(yǎng)基顏色變黃，所以應(yīng)每天都去觀察細(xì)胞生長的狀態(tài)，及時處理。

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拿到人乳腺癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？
    收到人乳腺癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)細(xì)胞后先不要開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察人乳腺癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議對收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況。
    收到人乳腺癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)細(xì)胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度：如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，剩余培養(yǎng)液可與新配制的培養(yǎng)液按一定的比例混合使用，待細(xì)胞生長穩(wěn)定后可替換成新配制的培養(yǎng)液；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

人乳腺癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)培養(yǎng)溫度
    大多數(shù)動物細(xì)胞的*佳生長溫度在37℃。昆蟲和兩棲動物細(xì)胞需要較低的生長溫度(如28℃)，因?yàn)橐恍﹦游锛?xì)胞是溫度敏感型。而培養(yǎng)的細(xì)胞可以承受相當(dāng)大幅度的降溫，大部分細(xì)胞可在4℃存活數(shù)天，很少量細(xì)胞能在超過*佳溫度2℃以上，存活幾個小時或更長時間。
人乳腺癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)細(xì)胞推薦培養(yǎng)基：我們推薦使用MLl原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（產(chǎn)品編號：PriMed-MLL-001）作為體外培養(yǎng)原代胸腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)基。 

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