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一、細胞來源與歷史背景

二、生物學特性

1. 形態(tài)與生長特性
   BHK-21 細胞貼壁生長時呈梭形或成纖維細胞樣，細胞輪廓清晰，貼壁能力強，可在培養(yǎng)瓶表面形成均勻單層。在對數(shù)生長期，細胞倍增時間約為 12–24 小時，增殖速度快，適合大規(guī)模培養(yǎng)。
2. 分子與功能特征
   • 病毒易感性：對多種病毒（如痘苗病毒、單純皰疹病毒、副流感病毒等）高度敏感，是研究病毒復制機制和制備病毒疫苗的理想模型。
   • 轉染效率高：易于通過脂質體轉染、電穿孔等方法導入外源基因，常用于重組蛋白表達和基因功能研究。
   • **性：作為非腫瘤源性細胞系，BHK-21 在疫苗生產中具有較低的致瘤性風險，符合生物制品**性要求。

三、培養(yǎng)方法與條件

1. 培養(yǎng)基與營養(yǎng)需求
   常用培養(yǎng)基為MEM（Minimum Essential Medium）或DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），需添加 10%–15% 胎牛血清（FBS）提供生長因子，同時補充 1% 雙抗（青霉素 / 鏈霉素）防止污染。pH 值需維持在 7.2–7.4，滲透壓控制在 280–320 mOsm/kg。
2. 培養(yǎng)環(huán)境
   細胞需在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，濕度保持在 95% 以上。當細胞融合度達到 80%–90% 時，需進行傳代：用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化液處理，輕柔吹打后按 1:3–1:5 比例接種至新培養(yǎng)瓶。
3. 凍存與復蘇
   凍存液采用 “90% FBS+10% DMSO”，細胞密度調整為 1×10?–5×10? cells/mL，經(jīng)程序降溫（-80℃過夜后轉入液氮）長期保存。復蘇時需快速解凍（37℃水浴），離心去除凍存液后更換新鮮培養(yǎng)基，以減少 DMSO 對細胞的毒性。

四、應用領域

1. 病毒學研究與疫苗生產
   • 病毒增殖：BHK-21 是生產獸用疫苗（如口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗）的核心細胞系，因其高效支持病毒復制且易于大規(guī)模培養(yǎng)。
   • 病毒載體構建：用于制備腺病毒、慢病毒等基因治療載體，或研究病毒與宿主細胞的相互作用機制。
2. 重組蛋白表達
   通過基因工程改造，BHK-21 可高效表達外源蛋白（如細胞因子、受體蛋白），尤其適用于需要翻譯后修飾的復雜蛋白生產，部分重組蛋白已應用于生物制藥領域。
3. 藥物毒性與細胞生物學研究
   • 作為體外模型評估藥物對哺乳動物細胞的毒性作用，檢測細胞形態(tài)、增殖率或凋亡指標。
   • 用于研究細胞信號通路、細胞黏附機制及細胞周期調控等基礎生物學問題。
4. 生物制品質量控制
   在疫苗和重組蛋白生產中，BHK-21 可用于病毒滴度測定、外源因子檢測等質量控制環(huán)節(jié)，確保產品**性與有效性。

五、注意事項

• 細胞污染監(jiān)測：定期檢查細胞形態(tài)及培養(yǎng)基狀態(tài)，避免細菌、真菌或支原體污染（可通過 PCR 或熒光染色檢測）。
• 傳代次數(shù)控制：長期傳代可能導致細胞特性改變（如核型異常），建議使用低代次細胞（<20 代）進行關鍵實驗。
• **性操作：涉及病毒培養(yǎng)時，需在生物**柜中操作，并遵循相應等級的實驗室**規(guī)范。

總結